Стандартная подготовка:
Подготовьте смешанный стандарт запаса точно весить (мг ±0.01) мг около 10 каждого стандарта ссылки кавалактоне в объемную склянку 10-мЛ. Не будет добавлять 7,0 мЛ метанола и будет соникате до растворенный. Разбавьте к тому с метанолом и смешайте.
Извещение: Альтернативно, подготовьте стандарт запаса кавайн подобным образом и используйте факторы ответа кавалактоне для того чтобы квантифицировать против.
Разбавьте стандарт запаса для создания минимум четырехточечной стандартной кривой. Предложенные стандартные разбавления запаса 1:10, 1:25, и 1:100 используя метанол.
Извещение: Храните стандарты на рефригератед температурах (0 - 5°К). Кавалактонес ухудшает быстро после 48 часов. Порекомендована подготовка свежих стандартов ссылки перед каждым анализом.
Прибор
· Откалибрированные аналитические весы точные к мг ±0.01
· Склянка, объемная, класс а, сортированные размеры
· Пробирки, хромотография с крышкой
· Система жидкостной хромотографии высокой эффективности как описано в главе УСП. Проверьте и документируйте этот прибор, программное обеспечение, и подсистемы соотвествуют требованиям производительности для квалификации установки/квалификации деятельности (ИК/ОК).
· Фильтруйте, 0,45 µм, нейлон Гелман Акродиск (П/Н 4426), полипропилен Вхатман Пурадиск™ (кот. Но. 6788-2504), стекло Вхатман ГД/С (кот. Но. 6894-2504) или соответствующее Соникатор
· Столбец, ИМКбасик, 5 µм, 4,6 кс 250 мм (кот. Нет БА99С05-2546ВТ). Соответствующий столбец, ИМК Дж'Сфере Х80, 4µ, 4,6 кс 250 (кот. Нет ДЖХ08С04-2546ВТ).
Реагенты
· Вода, ранг ХПЛК или Нанопуре
· Метанол, ранг ХПЛК
· Ацетонитрил, ранг ХПЛК
· Фосфорная кислота, ранг реагента АКС
Подготовка образца:
Заводской материал
Точно весьте (± 0.1мг) мг около 750 чисто отшлифованного стержня, шелушения, или материала корня.
Установите материал в объемную склянку 50-мЛ вместе с 40 мЛ метанола/воды (70/30). Соникате на 60 минут на комнатной температуре.
Позвольте склянке охладить к комнатной температуре и разбавить к тому с метанолом/водой (70/30) и смешать.
Образец фильтра и места в пробирку и крышку ХПЛК.
Порошок и мягкая выдержка (затир)
Точно весьте (мг ± 0,1) мг около 100 выдержки в объемную склянку 50-мЛ. (100 весов мг основан на содержании кавалактоне 50-60% в выдержке.) Извещение: Осторожно гомогенизируйте выдержку перед пробовать. Это не выполнено путем устанавливать выдержку в контейнере погруженном в 60° - воде 80° к горячей - ванна до свободный пропускать.
Добавьте 40 мЛ метанола и соникате на 10 минут или до всех твердых тел не будет растворять.
Позвольте склянке охладить к комнатной температуре и разбавить к тому с метанолом и смешать.
Образец фильтра и места в пробирку и крышку ХПЛК.
Образцы порошка
Выдержка Кава часто смешана или брызги - сушит на различные несущие. Успешно для того чтобы ассай образцы порошка, необходимо начать шаг подготовки образца который берет кавалактонес от несущей. Это может быть выполнено сперва извлекать с чистыми метанолом или водой.
Хроматографически условия:
Столбец: ИМКбасик, 5 µм, 4,6 кс 250 мм
Температура столбца: 40°К
Расход потока: 0,6 мЛ/мин для ИМКбасик; 1,0 мЛ/мин для Дж'Сфере
Мобильный период: исократик 0,1% фосфорной кислоты: алкоголь изопропила: ацетонитрил (64:16: 20 в/в)
Обнаружение: 220 нм (246 нм альтернативно для того чтобы улучшить селективность)
Том впрыски: µЛ 5
Продолжительность времени: 30 минут
Процедура:
Подготовьте решения ссылки стандартные и попробуйте подготовки как сразу.
Сделайте одиночную впрыску пробела растворителя извлечения.
Сделайте одиночную впрыску стандартных подготовок.
Создайте график линеарностей стандартных мест на вершине горы против стандартной концентрации.
Сделайте одиночные впрыски подготовок образца.
Высчитайте концентрацию кавалактоне в образце.
Пригодность системы:
Коэффициент соотношения линейной регрессии должен быть ≥0.999. Разрешение между десметхоксйянгонин и пиками янгонин должно быть ≥1.8.
КО. биотехнологии И-травы Шэньси, Лтд.